【その他の論文】

• Kitahara, K., Takahata, Y., Otani, M., Tanaka, M., Katayama, K., Yoshinaga, M., Fujita, K., and Suganuma, T.: Starch properties of transgenic sweetpotato plants modified by RNA interference of the starch synthase II gene. J. Appl. Glycosci., 58, 85-90 (2011). JAG
•  Al-Dabbas, M. M.,  Al-Ismail, K., Abu-Taleb, R., Hashimoto, F., Rabah, I. O., Kitahara, K. Fujita, K., and Suganuma, T.: Chemistry and antiproliferative activities of 3-methoxyflavones isolated from Varthemia iphionoides. Chem. Nat. Comp., 47, 17-21 (2011). SpringerLink
• Ashida, H., Ozawa, H., Fujita, K., Suzuki, S., and Yamamoto, K.: Syntheses of mucin-type O-glycopeptides and oligosaccharides using transglycosylation and reverse-hydrolysis activities of Bifidobacterium endo-α-N-acetylgalactosaminidase. Glycoconj. J., 27, 125-132 (2010).  pubmed 

Bifidobacterium longum由来のコア-1型のO-結合型糖タンパク質糖鎖を特異的に切断する endo-α-N-acetylgalactosaminidaseの糖転移反応と逆反応を用いて、ムチン型糖ペプチドとオリゴ糖の合成を行った。

• Umekawa, M., Huang, W., Li, B., Fujita, K., Ashida, H., Wang, L. X., and Yamamoto, K.: Mutants of Mucor hiemalis endo-β-N-acetylglucosaminidase show enhanced transglycosylation and glycosynthase-like activities. J. Biol. Chem., 283, 4469-4479 (2008). pubmed 

オキサゾリン中間体を用いた新しいneoglycocojugateの構築法を開発した。

• Kitahara, K., Hamasuna, K., Nozuma, K., Otani, M., Hamada, T., Shimada, T., Fujita, K., and Suganuma, T.: Physicochemical properties of amylose-free and high-amylose starches from transgenic sweetpotatoes modified by RNA interference. Carbohydrate Polymers, 69, 233-240 (2007). ScienceDirect
  
• Yamanoi, T., Yoshida, N., Oda, Y., Akaike, E., Tsutsumida, M., Kobayashi, N., Osumi, K., Yamamoto, K., Fujita, K., Takahashi, K., and Hattori, K. : Synthesis of mono-glucose-branched cyclodextrins with a high inclusion ability for doxorubicin and their efficient glycosylation using Mucor hiemalis endo-β-N-acetylglucosaminidase. Bioorg. Med. Chem. Lett., 15, 1009-1013 (2005). pubmed
• Osumi, K., Makino, Y., Akaike, E., Yamanoi, T., Mizuno, M., Noguchi, M., Inazu, T., Yamamoto, K., and Fujita, K. : Mucor hiemalis endo-β-N-acetylglucosaminidase can transglycosylate a bisecting hybrid-type oligosaccharide from an ovalbumin glycopeptide. Carbohydr. Res., 339, 2633-2635 (2004). pubmed
• Fujita, K., Takami, H., Yamamoto, K., and Takegawa, K. : Characterization of endo-β-N-acetylglucosaminidase from alkaliphilic Bacillus halodurans C-125. Biosci. Biotechnol. Biochem., 68, 1059-1066 (2004). pubmed

好アルカリ性細菌Bacillus halodurans C-125由来のendo-β-N-acetylglucosaminidaseをクローニングし発現させたところ、Endo-Aと同様の基質特異性、糖転移活性を有していた。Endo-Aと相同性を示さないＣ末端領域を除いても酵素活性に影響を及ぼさないことから、酵素活性には必須でない領域であることを明らかにした。

• Mizutani, K., Okamoto, I., Fujita, K., Yamamoto, K., and Hirose, M. : Structural and functional characterization of ovotransferrin produced by Pichia pastoris. Biosci. Biotechnol. Biochem., 68, 376-383 (2004). pubmed

ニワトリの血清トランスフェリンであるオボトランスフェリンを、メタノール資化性酵母Pichia pastorisを用いて、高マンノース型糖鎖が付加された組み換え酵素の大量発現および精製に成功した。

• Yamanoi, T., Tsutsumida, M., Oda, Y., Akaike, E., Osumi, K., Yamamoto, K., andFujita, K. : Transglycosylation reaction of Mucor hiemalis endo-β-N-acetylglucosaminidase using sugar derivatives modified at C-1 or C-2 as oligosaccharide acceptors. Carbohydr. Res., 339, 1403-1406 (2004). pubmed

DMSO等の水溶性有機溶媒を添加することで複合型糖鎖をC-1,C-2位に様々な官能基を付加させた難水溶性のアクセプター基質に糖転移させることに成功した。これにより、Endo-Mの糖転移反応におけるアクセプターの自由度を高め、糖転移反応の有効性を高めることができた。

• Akaike, E., Tsutsumida, M., Osumi, K., Fujita, M., Yamanoi, T., Yamamoto, K., and Fujita, K. : High efficiency of transferring a native sugar chain from a glycopeptide by a microbial endoglycosidase in organic solvents. Carbohydr. Res., 339, 719-722 (2004). pubmed

DMSO等の有機溶媒をEndo-Mの酵素反応系に添加することで、糖転移効率を高めることに成功した。

• Kato, T., Fujita, K., Takeuchi, M., Kobayashi, K., Natsuka, S., Ikura, K., Kumagai, H., and Yamamoto, K. : Identification of an endo-β-N-acetylglucosaminidase gene in Caenorhabditis elegans and its expression in Escherichia coli. Glycobiology, 12, 581-587 (2002). pubmed

線虫(C. elegans)を用いて多細胞生物からのendo-β-N-acetylglucosaminidaseのクローニングに初めて成功した。大腸菌で発現させた本酵素は、糖転移活性を有しており、高マンノース型糖鎖、複合型糖鎖のいずれにも作用することを明らかにした。 

• Fujita, K., Miyamura, T., Sano, M., Kato, I., and Takegawa, K. : Transfer of high-mannose-type oligosaccharides to disaccharides by endo-β-N-acetylglucosaminidase from Arthrobacter protophormiae. J. Biosci. Bioeng., 93, 614-617 (2002). pubmed

各種二糖類をアクセプターとしてEndo-Aの糖転移効率を調べた結果、二糖間の結合がβの方がαより高い糖転移活性を示したことから、単糖の構造だけでなく二糖間の結合が転移効率に重要な影響を及ぼすことを明らかにした。

• Fujita, K., and Takegawa, K. : Tryptophan-216 is essential for the transglycosylation activity of endo-β-N-acetylglucosaminidase A. Biochem. Biophys. Res. Commun., 283, 680-686 (2001). pubmed

ランダム変異導入と部位特異的変異導入を用いてEndo-Aの加水分解活性にGlu173が重要であることを明らかにした。また、Trp216をArgに変異させることで糖転移活性のみが完全に消失したことから、Trp216が糖転移活性に重要なアミノ酸であることを明らかにした。

• Fujita, K., and Takegawa, K. : Chemoenzymatic synthesis of neoglycoproteins using transglycosylation with endo-β-N-acetylglucosaminidase A. Biochem. Biophys. Res. Commun., 282, 678-682 (2001). pubmed

Endo-Aの糖転移活性を用いてisothiocyanatophenyl β-D-glucopyranoside (Glc-ITC)に高マンノース型糖鎖を糖転移させたMan6GlcNAc-Glc-ITCを用いて、糖鎖を持たないタンパク質のリジン残基に天然の糖タンパク質糖鎖を導入する新しい方法を確立した。

• Fujita, K., Nakatake, R., Yamabe, K., Watanabe, A., Asada, Y., and Takegawa, K. : Identification of amino acid residues essential for the substrate specificity of Flavobacterium sp. endo-β-N-acetylglucosaminidase. Biosci. Biotechnol. Biochem., 65, 1542-1548 (2001). pubmed

Flavobacterium sp.由来のendo-β-N-acetylglycosaminidase (Endo-Flavo)のクローニングを行い、Endo-Flavoの酵素活性に重要なアミノ酸の同定に成功した。また、基質特異性を変化させる変異体の取得にも成功した。

• Fujita, K., Tanaka, N., Sano, M., Kato, I., Asada, Y., and Takegawa, K. : Synthesis of neoglycoenzymes with homogeneous N-linked oligosaccharides using immobilized endo-β-N-acetylglucosaminidase A. Biochem. Biophys. Res. Commun., 267, 134-138 (2000). pubmed

GST融合Endo-Aタンパク質の高発現系を確立した。また、これを固定化酵素として利用し、糖タンパク質の糖鎖を変性させることなくすげ替えるネオ糖タンパク質合成法を確立した。

• Fujita, K., Asada, Y., Yamamoto, K., and Takegawa, K. : Plate assay for endo-β-N-acetylglucosaminidase activity using a chromogenic substrate synthesized by transglycosylation with Arthrobacter endo-β-N-acetylglucosaminidase. J. Biosci. Bioeng., 90, 462-464 (2000). pubmed

Man6GlcNAcを5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-glucoside (X-Glc)へ転移させたMan6GlcNAc-Glc-Xを塗布した寒天培地を用いて、組み換え大腸菌が生産するendo-β-N-acetylglucosaminidaseのプレートアッセイに成功した。

• Tanaka, N., Awai, A., Bhuiyan, M. S., Fujita, K., Fukui, H., and Takegawa, K. : Cell surface galactosylation is essential for nonsexual flocculation in Schizosaccharomyces pombe. J. Bacteriol., 181, 1356-1359 (1999). pubmed
• Bhuiyan, M. S., Ito, Y., Nakamura, A., Tanaka, N., Fujita, K., Fukui, H., and  Takegawa, K. : Nystatin effects on vacuolar function in Saccharomyces cerevisiae. Biosci. Biotechnol. Biochem., 63, 1075-1082 (1999). pubmed
• Takegawa, K., Fujita, K., Fan, J. Q., Tabuchi, M., Tanaka, N., Kondo, A., Iwamoto, H., Kato, I., Lee, Y. C., and Iwahara, S. : Enzymatic synthesis of a neoglycoconjugate by transglycosylation with Arthrobacter endo-β-N-acetylglucosaminidase: A substrate for colorimetric detection of endo-β-N-acetylglucosaminidase activity. Anal. Biochem., 257, 218-223 (1998). pubmed

Endo-Aの糖転移活性を利用して、Man6GlcNAcをp-nitrophenyl-α-glucoside (pNP-Glc)へ転移させたMan6GlcNAc-Glc-pNPとα-グルコシダーゼを共存させることにより、簡便なエンドグリコシダーゼ活性測定方法を確立した。

• Takegawa, K., Yamabe, K., Fujita, K., Tabuchi, M., Mita, M., Izu, H., Watanabe, A., Asada, Y., Sano, M., Kondo, A., Kato, I., and Iwahara, S. : Cloning, sequencing, and expression of Arthrobacter protophormiae endo-β-N-acetylglucosaminidase in Escherichia coli. Arch. Biochem. Biophys., 338, 22-28 (1997). pubmed

Arthrobacter protophormiae由来endo-β-N-acetylglucosaminidase（Endo-A)のクローニングを行った結果、既知の酵素と相同性の無い24アミノ酸のシグナルペプチドと621アミノ酸の成熟タンパク質をコードしていた。また、native酵素と同様の糖転移活性を有することを確認した。